一、什么是類胡蘿卜素：

       類胡蘿卜素是自然界中廣泛存在的黃色、橙紅色或紅色多烯物質(zhì)。它們是在胡蘿卜中發(fā)現(xiàn)的，因此得名。人體不能合成類胡蘿卜素，因此主要通過食物獲得。水果和蔬菜是類胡蘿卜素的主要食物來源。

       類胡蘿卜素由8個類異戊二烯單元組成，根據(jù)分子組成可分為胡蘿卜素和葉黃素兩大類。前者只含有烴和氫兩種元素，而后者是前者的含氧衍生物，含有一個或多個氧原子形成羥基、羰基、甲氧基和環(huán)氧化合物。類胡蘿卜素最重要的代表是β-胡蘿卜素、番茄紅素、葉黃素、玉米黃質(zhì)、蝦青素和斑蝥素。

       二、類胡蘿卜素的作用：

       膳食類胡蘿卜素是維生素的前體，可預(yù)防多種慢性退行性疾病。類胡蘿卜素分析對于了解它們對人類健康的重要性是必要的。然而，現(xiàn)有的用于分離主要類胡蘿卜素的高效液相色譜 (HPLC) 方法需要更長的分析時間，并且不能充分分離紫黃質(zhì)和新黃質(zhì)。

      類胡蘿卜素的一些特性，例如它們在自然界中的存在、不同的濃度、對異構(gòu)化的敏感性以及高度不飽和類胡蘿卜素的氧化，使得單個類胡蘿卜素的量化成為一項 具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。在分析類胡蘿卜素時，需要采取預(yù)防措施以盡量減少異構(gòu)化、氧化和降解。

       三、分離方法：

       已經(jīng)采用了多種方法來檢測食品樣品中的類胡蘿卜素，從薄層色譜到高壓液相色譜 (HPLC) 以及 HPLC 與包括 MALDI-TOF 在內(nèi)的質(zhì)譜相結(jié)合。鑒定和定量類胡蘿卜素多用的方法是利用 HPLC 與紫外-可見吸收檢測相結(jié)合。

       雖然使用正相和反相HPLC都可以進行類胡蘿卜素的分離，但是由于非極性類胡蘿卜素的分離較差，正相HPLC不適用于類胡蘿卜素的分離。相比之下，反相 HPLC 能夠顯著增加分析物和非極性固定相之間的相互作用，從而提高類胡蘿卜素的分離度。

       四、C18色譜柱：

       在這些色譜柱中，等度或梯度模式的 C18 色譜柱是類胡蘿卜素分離的一種選擇。與 HPLC 相比，UHPLC 具有多項優(yōu)勢，例如更高的峰容量、更小的峰寬、更高的靈敏度和更高的色譜分離度。更短的分析時間也大大節(jié)省了流動相溶劑。

        USHA C18-G色譜廣泛用于分析極性物質(zhì)和疏水性物質(zhì)，是集耐久性、良好峰形顯示和重現(xiàn)性特別于一身的ODS柱。由于 C30 固定相色譜柱無法用于 UHPLC，因此 C18 色譜柱已被用于類胡蘿卜素分離，盡管 C18 柱對類胡蘿卜素異構(gòu)體的分離度較差。

        五、提取方法：

（根據(jù)各種類胡蘿卜素在提取溶劑中的溶解度和穩(wěn)定性確定具體方法）

固相萃取 (SPE)

液液萃取

超臨界流體萃取 (SFE)

基質(zhì)固相分散 (MSPD)

皂化

測定方法：紫外/可見分光光度法

高效液相色譜法（此類方法是分離、鑒定和定量食品和生物樣品中類胡蘿卜素的一種方法）

       分析 HPLC 類胡蘿卜素的檢測器是光電二極管陣列 (PDA)，但也可以使用電化學(xué)檢測器 (ECD)、熒光檢測器、質(zhì)譜檢測器 (MS) 和核磁共振 (NMR) 等檢測器。

       六、流動相：

       類胡蘿卜素分離的優(yōu)化需要進樣溶劑和流動相的相容性。理想情況下，進樣溶劑應(yīng)與流動相相容或比反相極性更強，以提供樣品的柱上濃度。如果類胡蘿卜素在進樣溶劑中比在流動相中更易溶解，特別是當溶液接近飽和時，進樣時類胡蘿卜素會沉淀，導(dǎo)致峰拖尾?；蛘?，它們會在通過色譜柱時保留在進樣溶劑中，從而產(chǎn)生寬帶和雙峰 。另一方面，如果進樣溶劑太弱，樣品將不會*溶解在流動相中。

       樣品和溶劑過濾可防止小容量進樣器接頭堵塞、劃傷和泄漏?；芈坊驈U液管路堵塞會導(dǎo)致高背壓和回路填充困難。位于閥進樣器和色譜柱之間以減少譜帶展寬的低死體積接頭也容易堵塞。導(dǎo)致 HPLC 問題的其他因素包括不匹配或損壞的進樣器組件、可變的樣品量、泄漏和增加的系統(tǒng)壓力。通過過濾，經(jīng)過適當調(diào)整和清潔的注射器應(yīng)持續(xù) 5,000 次注射。

       選擇合適的過濾器需要了解過濾器/溶劑的兼容性以及過濾器的化學(xué)/物理特性。恒譜生建議客戶選擇多階不銹鋼進樣口過濾器，配套用于外徑1/8英寸或1/16英寸的管子，放置于流動相溶劑瓶中，過濾雜質(zhì)。

       選擇不正確的過濾器可能會導(dǎo)致可萃取物質(zhì)危及分析結(jié)果。對于色譜分析，由可萃取材料引起的情況包括樣品吸收、共流出和外來峰。